Biochemische Labormethoden by Martin Holtzhauer PDF

By Martin Holtzhauer

M. Holtzhauer hat in seinem Werk biochemische Methoden und Stoffdaten zusammengestellt. In shape von uberpruften Laborvorschriften sind vielseitig einsetzbare Arbeitsanleitungen fur die analytische Proteinbiochemie sowie ausgewahlte Beispiele fur praparatives Arbeiten aufgenommen und mit zahlreichen Tabellen erganzt. Um eine leichte Handhabung zu gewahrleisten, wurde auf theoretische Einfuhrungen in die jeweiligen Methoden weitestgehend verzichtet und statt dessen auf Spezialliteratur verwiesen. Das Methodenspektrum reicht von quantitativen Bestimmungsmethoden uber elektrophoretische und immunchemische Protokolle bis zu Rezeptor- und Enzymassays, von allgemeinen praktischen Hinweisen zu chromatographischen Verfahren bis zu Beispielen mehrstufiger Proteinisolierungen.

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Elektrodenpuffer ist D. Die Trennung wird unter Kfihlung mit 6 bis 8 V/em oder mit 3 V/em bei Raumtemperatur fiber Naeht durehgeffihrt. Es ist ratsam, nieht die gesamt Trenngellange ffir die Trennung auszunutzen, sondern die Elektrophorese abzubrechen, wenn der Markerfarbstoff (Bromphenolblau) etwa 3/4 der Trennstreeke zurfiekgelegt hat. 4. Pipettiersehema fur HarnstoffSDS-PAGE (Losungen A' bzw. 1 Elektrophoresesysteme 37 Abschn. 1 angegebenen Fixierlosungen vor der Farbung zu flxieren, urn den Harnstoff zu entfernen.

Physio!. Chern. 3 DNA-Bestimmung mit Diphenylamin Lbsungen MeBwellenlange A 5 % Perchlorsaure (w/v) B 10% Perchlorsaure (w/v) C 300 mg Diphenylamin werden in 20 ml dest. Eisessig geli:ist, dazu werden 0,3 ml konz. Schwefelsaure und dann 0,1 ml 50 %iger waBriger Acetaldehyd gegeben. Diese Losung ist jeweils vor Gebrauch frisch zu bereiten. Das SCHMIDT-THANNHAUSER-Trockenpulver wird mit 1,0 ml A versetzt bzw. die DNA-haltige Losung wird mit einem gleichen Volumen an B versetzt und mit A auf 1,0 ml aufgefUllt.

Fur selbstgegossene Polyacrylamid-Gele ist die vertikale Laufanordnung gunstiger, auch ist hierbei der Probenauftrag leichter zu beherrschen. Ob mit selbstgegossenen oder mit kommerziell gefertigten Gelen gearbeitet wird, ist eine finanzielle Frage und eine Frage von Reproduzierbarkeit von Lauf zu Lauf, die bei industriell gefertigten Gelen in der Regel hoher ist, von laborpraktischer Routine und experimenteller Geschicklichkeit abgesehen. Wenn nicht besondere praparative Aufgaben zusatzlich zur analytischen Trennung gelost werden sollen oder das Probenvolumen grogere Auftragetaschen verlangt, empfiehlt es sich, ein Gel mit geringer Schichtdicke (1 mm und weniger, bei dunnen Gelen auf einer Tragerfolie mechanisch stabilisiert) zu verwenden.

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